El cólera es una epidemia mundial y es la enfermedad infecciosa más antigua conocida. Todas las pandemias que se han registrado son atribuibles al serogrupo O1 de Vibrio cholerae (Clemens, Nair, Ahmed, Qadri, & Holmgren, 2017). El serogrupo O139 de V. cholerae ha sido responsable de algunos brotes, pero solo en Asia (World Health Organization, 2022). Aunque V. cholerae puede expresar diferentes factores de virulencia, la toxina colérica (TC) es el más importante en la patogenia (World Health Organization, 2022). En los últimos años, se han reportado cepas de serogrupos no O1/no O139 de V. cholerae que son dignos de atención debido a que portan el gen de la TC (ctx) o la producen. (Takahashi et al., 2021).
En la actualidad, existen tres tipos principales de métodos de detección de V. cholerae:
(1)Las pruebas basadas en el cultivo son consideradas de referencia (“Gold Standard”) para el diagnóstico, a pesar de que se distinguen por la elevada laboriosidad, el tiempo de respuesta prolongado (48 h a 72 h) y la sensibilidad variable y limitada (Yan et al., 2022).
(2) La identificación por espectrometría de masas de tiempo de vuelo (MALDI-TOF, por sus siglas en inglés) que puede analizar perfiles proteicos específicos de bacterias en poco tiempo, en tan solo 10 min, pero requiere del aislamiento mediante cultivo. Solo se puede alcanzar una identificación al nivel de especie de V. cholerae y no se pueden identificar el serogrupo ni la toxigenicidad (Yan et al., 2022).
(3) Los métodos basados en la amplificación de ácidos nucleicos, como la PCR en tiempo real, pueden acortar el tiempo de detección de V. cholerae de días a horas (típicamente no más de 3 h (Greig et al., 2018)). Se destacan, además, por la simplicidad, la objetividad del análisis y la interpretación de los resultados y la elevada sensibilidad, especificidad y eficiencia. Por ello, las pruebas basadas en la amplificación de ácidos nucleicos son las que mejor satisfacen las necesidades de prevención y el control del cólera (Yan et al., 2022).
USO PREVISTO
Facilitar el diagnóstico, y manejo del paciente con cólera, mediante la detección por PCR en tiempo real, de cuatro marcadores
genéticos que ofrecen criterios para definir:
• La infección por V. cholerae.
• La tipificación mediante la identificación de los serogrupos O1 y O139 de V. cholerae.
• La toxigenicidad mediante la detección de uno de los genes de la toxina (ctxA) de V. cholerae.
MUESTRAS ÚTILES PARA EL ESTUDIO
Deposiciones diarreicas estabilizadas en el medio Cary-Blair o no estabilizadas y colectadas en un frasco estéril.
TIEMPO DE ENTREGA DE LOS RESULTADOS
No más de 28 horas, luego de que se reciba la muestra en el departamento de Biología Molecular de Referencia Laboratorio Clínico.
CONDICIONES DE TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS
BIBLIOGRAFÍA DE CONSULTA
Clemens, J. D., Nair, G. B., Ahmed, T., Qadri, F., & Holmgren, J. (2017). Cholera. Lancet, 390(10101), 1539-1549.
doi:10.1016/S0140-6736(17)30559-7
Greig, D. R., Hickey, T. J., Boxall, M. D., Begum, H., Gentle, A., Jenkins, C., & Chattaway, M. A. (2018). A real-time multiplex PCR
for the identification and typing of Vibrio cholerae. Diagn Microbiol Infect Dis, 90(3), 171-176.
doi:10.1016/j.diagmicrobio.2017.11.017
Takahashi, E., Ochi, S., Mizuno, T., Morita, D., Morita, M., Ohnishi, M., . . . Okamoto, K. (2021). Virulence of Cholera Toxin
Gene-Positive Vibrio cholerae Non-O1/non-O139 Strains Isolated From Environmental Water in Kolkata, India. Frontiers in
Microbiology, 12. doi:10.3389/fmicb.2021.726273
World Health Organization. (2022, 30 March). Cholera Retrieved from
https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/cholera
Yan, Y., Zhan, L., Zhu, G., Zhang, J., Li, P., Chen, L., . . . Chen, Z. (2022). Direct and Rapid Identification of Vibrio Cholerae
Serogroup and Toxigenicity by a Novel Multiplex Real-Time Assay. Pathogens, 11(8). doi:10.3390/pathogens11080865
I12174A Instructivo Toma de Muestra Vibrio Cholerae por PCR 2
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